廖思聪1,2,3 朱彩玉1,2,3 邬慧贤1,2,3 金俊飞1,2,3
1.yd云顶集团官网附属医院广西肝脏损伤与修复分子医学重点实验室2.yd云顶集团官网附属医院广西神经鞘脂代谢相关疾病基础研究重点实验室3.yd云顶集团官网附属医院中美健康与疾病脂质研究中心
摘要：目的 探究铁死亡在肝癌细胞对仑伐替尼（Lenva）耐药中的作用，为预防或逆转Lenva耐药提供新思路。方法 体外培养人肝癌细胞系PLC/PRF/5,即亲本细胞（PC）采用梯度浓度诱导法构建Lenva耐药细胞（LRC）;利用RNA-seq技术对LRC和PC两种细胞进行转录组测序，测序结果进行差异表达基因分析及KEGG富集分析；采用CCK-8法测定细胞活力，采用免疫印迹检测铁死亡相关蛋白，利用DHE探针检测细胞活性氧（ROS）,应用透射电镜观察细胞线粒体形态。结果 Lenva处理PC和LRC 24 h,半数抑制浓度(IC50)分别为24.88μmol/L和89.34μmol/L,提示Lenva耐药人肝癌细胞体外诱导成功。RNA-seq测序检测到12 106个基因，与PC比较，LRC 88个基因上调，197个基因表达下调。差异基因的KEGG通路富集分析结果显示，铁死亡信号通路位列其中。利用10μmol/LLenva处理细胞48 h,与PC相比，LRC铁死亡相关蛋白SLC7A11和GPX4表达增加，ROS含量降低。电镜结果显示，与PC相比，特征性铁死亡线粒体形态改变的LR相比，特征性铁死亡线粒体形态改变的LRC明显减少。结论 肝癌细胞对Lenva耐药可能涉及多种基因和信号途径，其中铁死亡抵抗机制可能是引起肝癌细胞耐Lenva的关键。
关键词：仑伐替尼;肝癌;耐药;铁死亡;
基金资助：国家自然科学基金项目(81960520)；广西科技厅中央引导地方科技发展资金项目(桂科ZY21195024)；广西自然科学基金重点项目(2020GXNSFDA238006)；桂林市第三批漓江学者支持计划(2022-5-07)；
